Uma equipe de pesquisa desenvolveu um imunoensaio de fluxo lateral mediado por ponte multissítio (mbLFIA) que permite a detecção portátil e altamente sensível de vírus transmitidos por mosquitos, usando o vírus Chikungunya (CHIKV) como alvo modelo. Ao redesenhar produtos de amplificação de ácido nucleico para criar múltiplos locais de ponte e emparelhar esta estratégia com aprimoramento colorimétrico baseado em nanopartículas gold@platinum, o método alcançou um limite de detecção visual tão baixo quanto 2 pmol · L -1 para CHIKV. O trabalho oferece uma plataforma de diagnóstico promissora para testes rápidos no terreno, vigilância de surtos e controlo de infecções, especialmente em regiões com recursos limitados onde os instrumentos laboratoriais convencionais são de difícil acesso.
Os vírus transmitidos por mosquitos, incluindo o CHIKV, o vírus da dengue, o vírus Zika, o vírus da febre amarela, o vírus da encefalite japonesa, o vírus do Nilo Ocidental e o vírus Getah, continuam a representar ameaças crescentes à saúde pública, à medida que as viagens internacionais, o comércio e a expansão dos vectores relacionados com o clima aumentam os riscos de transmissão. O teste de ácido nucleico fornece alta precisão porque detecta sequências genéticas virais intrínsecas e pode ajudar a distinguir variantes virais. No entanto, métodos amplamente utilizados, como reação em cadeia da polimerase com transcrição reversa (RT-PCR), amplificação isotérmica mediada por loop de transcrição reversa, amplificação por círculo rolante e ensaios baseados em CRISPR geralmente dependem de enzimas, ciclos térmicos, leitores de fluorescência ou outros equipamentos especializados. Os ensaios de fluxo lateral baseados em montagem em gancho catalítico existentes melhoraram a portabilidade, mas sua sensibilidade é limitada pelo pequeno número de locais disponíveis para conectar sondas colorimétricas à linha de teste. Estas limitações destacam a necessidade de uma plataforma mais simples, mais sensível e sem enzimas, adequada para detecção viral no local.
Um estudo (DOI: 10.48130/targetome-0026-0016) publicado em Destino em 30 de abril de 2026 pela equipe de Yanmin Ju, China Pharmaceutical University, relata uma estratégia mbLFIA livre de enzimas que fortalece os sinais das tiras de teste por meio de pontes moleculares multisítios e deposição de cor catalisada por nanopartículas Au@Pt.
Os pesquisadores primeiro projetaram um sistema de montagem em gancho catalítico (CHA) de duas rodadas envolvendo quatro sondas em gancho, H1, H2, H3 e H4. Quando o RNA alvo do CHIKV está presente, ele desencadeia a hibridização entre H1 e H2, liberando o alvo para iniciar ciclos de amplificação adicionais. O complexo H1H2 resultante ativa então H3 e H4 para gerar produtos de hibridização H3H4. Ao contrário dos produtos convencionais com locais de ponte limitados, os produtos H3H4 foram projetados com vários locais de ligação equivalentes, permitindo-lhes conectar sondas Au@Pt-DNA à linha de teste através de dois mecanismos de ponte. Este projeto aumentou acentuadamente o sinal colorimétrico: em baixa concentração de produto, a estrutura multissite produziu um sinal 10,8 vezes e 9,6 vezes mais forte do que dois designs de locais limitados. A equipe então sintetizou nanopartículas de Au@Pt, confirmou sua estrutura e composição usando microscopia eletrônica de transmissão, espectroscopia de fotoelétrons de raios X, difração de raios X e análises relacionadas, e demonstrou sua forte atividade catalítica semelhante à peroxidase. Essas nanopartículas catalisaram a oxidação do 3-amino-9-etilcarbazol (AEC), formando um precipitado marrom-avermelhado insolúvel na linha de teste e amplificando ainda mais a leitura visual. Após otimizar a temperatura de reação, proporções de gancho, tempo de reação, volume da sonda, concentração de AEC, concentração de peróxido de hidrogênio e tempo de aprimoramento, o ensaio mostrou uma faixa de detecção visual de 2 a 10⁴ pmol·L−1 após realce colorimétrico, em comparação com 20 a 10⁴ pmol·L−1 para o ensaio geral. Os testes de especificidade mostraram que o sinal do CHIKV foi significativamente mais forte que os sinais do ZIKV, DENV, WNV, YFV, JEV e GETV. Nas matrizes de soro, saliva e urina enriquecidas, as taxas de recuperação permaneceram entre 80% e 120%, indicando boa tolerância a amostras biológicas. Finalmente, em 36 amostras de soro de camundongos com suspeita de CHIKV, o mbLFIA identificou 16 positivos e 20 negativos, correspondendo aos resultados de RT-PCR com 100% de concordância, sensibilidade e especificidade.
Este estudo fornece uma nova estratégia para fortalecer os sinais do ensaio de fluxo lateral, aumentando o número e a eficiência dos eventos de ponte molecular. Ao combinar amplificação de CHA sem enzimas, produtos de hibridização multissítio e deposição de AEC assistida por nanozimas, a plataforma melhora a sensibilidade visual sem a necessidade de instrumentos complexos. Os investigadores sugerem que o mbLFIA poderia apoiar a detecção rápida de vírus transmitidos por mosquitos em clínicas, portos, estações de campo e áreas com poucos recursos, e pode ser adaptado para aplicações mais amplas de testes de ácido nucleico na vigilância de doenças infecciosas.
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